缺口平移（缺口平移）

主要介绍

nick translation法，标记DNA探针.

缺口翻译法或切口平移法是实验室最常用的一种脱氧核糖核酸探针标记法。利用E.coli DNA多聚酶I的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新合成的DNA链中从而形成高比活性的均匀标记的DNA探针。线状、超螺旋及带缺口的环状双链DNA均可作为缺口平移法的模版。

基本原理：

以限量的DNase I在待标记的双链DNA的每一条链上产生若干个单链缺口；再利用E.coli DNA多聚酶I的 5’-3’外切酶活性和5’-3’多聚酶活性，在缺口处的5’末端每切除一个核苷酸，则在3’末端添加一个核苷酸，以修补缺口，随着缺口在DNA链上的移动，标记的核苷酸就掺入到新合成的DNA链中。

此法特点是快速、简便、标记的探针均匀、特异性高；适用于较长的双链DNA；DNA多聚酶必须是E.Coli DNA多聚酶的全酶；DNA酶I的浓度一定要适宜。

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