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血凝实验（检测抗红细胞不完全抗体的方法）

次浏览 | 更新时间：2023-05-19

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血凝实验

检测抗红细胞不完全抗体的方法

血凝试验又称为Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种的方法。它分为直接Coombs试验和间接Coombs试验，直接试验的目的是检查红细胞表面的不完全抗体而间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。

基本信息

中文名	血凝实验
外文名	Hemagglutination test
建立时间	1945年
分类	直接Coombs试验和间接Coombs试验

概念阐述

抗球蛋白参与的血凝试验由Coombs于1945年建立，故又称为Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种很有用的方法。所谓不完全抗体，多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但在一般条件下不出现可见反应。Coombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。

主要方法

经常用作试验的有两类方法。

直接Coombs试验

将含球蛋白的试剂直接加到红细胞表面结合抗体的细胞悬液中，即可见细胞凝集（图13-6）。可用玻片法定性测定，也可用试管法作半定量分析。常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。

间接Coombs试验

用以检测游离的血清中的不完全抗体。将受检血清和具有待测不完全抗体相应抗原性的红细胞相结合。再加入抗球蛋白抗体就可出现可见的红细胞凝集（图13-7）。此试验多用于检测母体Rh（D）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生。亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。

Coombs试验除了广泛应用于血液病的检测外，还可采用专一特异性的抗球蛋白的血清如IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体的免疫球亚类。

有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。

试验方法

目的要求

掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。

材料与试剂

1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50L定量移液器，滴头，微型振荡器。

2. 生理盐水，0.5% 鸡红细胞悬液。

3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。

操作方法

血球凝集(HA)试验

1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50mL生理盐水。

2. 于左侧第1孔加50mL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50mL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50mL；第12孔为红细胞对照。

3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50mL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。

表 4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：L）

孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

病毒稀释度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对照

生理盐水 50

病毒液 50

0.5%红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50

弃50

结果观察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - -

结果判定

从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。

以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。

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